伊莎、莫莉以及朋友们一起回到学校参加校友会，俩人见面时还有些尴尬，她们的关系也没有恢复如初。莫莉有些担心她们再也回不到过去了，凯莉安慰她，应该顺其自然不要太强求。伊莎等人在校友会上遇到了不少老同学，他们一起回忆起当年的快乐时光，同学们还想撮合莫莉和学生时代的男朋友欧马利重归于好；而凯莉却被误认为已经去世，但生性乐观的她也并不以为意。

影片讲述了新生代蜘蛛侠迈尔斯·莫拉莱斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）携手蜘蛛格温·斯泰西（海莉·斯坦菲尔德 Hailee Steinfeld 配音），穿越多元宇宙踏上更宏大的冒险征程的故事。面临每个蜘蛛侠都会失去至亲的宿命，迈尔斯誓言打破命运魔咒，找到属于自己的英雄之路。而这个决定和米格尔·奥哈拉（奥斯卡·伊萨克 Oscar Is aac 配音）所领军的蜘蛛联盟产生了极大冲突，一场以一敌百的蜘蛛侠大内战即将拉响！